Вакцина против гепатита в способ получения — Купить препараты от гепатита С Hetero labs
8 800 505 35 28
новые препараты от гепатита с
оставьте заявку

на помощь в выборе препарата

вы гарантировано получите:
  • garanty

    Гарантию излечения

  • delivery

    Бесплатную доставку

  • wallet

    Оплату после получения

Вакцина против гепатита в способ получения

 

@, яуот п,72872О

Союз Соаетсккз

Соцкалмстическкх

Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 120376 (21) 2332953/28-13 (23) Приоритет — (32) 17. 11. 75 (51) М. Кл.

С 12 К 5/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (З) США (31) 631961 (53) УДК 615 ..372 (088. 8) Опубликовано 150480. Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 150480 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Альфред МайеР ПРинс, Александер Роберт Ньюрат (США), Джон Внек (ЧССР) и Кристиан Трепо (Франция) Иностранная фирма

1 1

Дзе Коммьюнити Блад Каунсил оф Грейтер Нью-йорк, Инк (США) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ГЕПАТИТА В

15

30

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается производства бактерийных препаратов.

Известен способ получения вакцины против гепатита В путем выделения частиц HBsAg, содержащих е-антиген на частицах или в растворе, из плазмы крови носителей антигена гепатита В, содержащей е-антиген с последующей инактивацией целевого продукта (1) . Однако вакцина, полученная . известным способом, не обладает высокой специфичностью.

Целью изобретения является повышение специфичности вакцины.

Эта цель достигается тем, что плазму крови обрабатывают 3,04,5 вес.Ъ полиэтиленгликоля при РН

4,4-4,7, полученный осадок, содержащий HBsAg частицы размером 30-50 нм, растворяют при РН 4,9-5,1, затем

РН надосадочной жидкости доводят до 4,4-4,7, повторно обрабатывают полиэтиленгликолем и полученный осадок растворяют в физиологическом растворе.

Кроме того, целевой продукт инактивируют обработкой формалином или р -пропиолактоном или облучением рентгеновскими лучами.

Предлагаемым способом получают вакцину против вирусного гепатита, которая включает в свой состав антигенные частицы, имеющие размер частиц 20-50 нм, причем эти антигенные частицы содержат неосажденные свободные необъединенные гепатит р-поверхностные антигены. Вакцина имеет менее 10 единиц антител гепатит Р --поверхностного антигена на 1000 ед. гепатит -поверхностного антигена. 5Ъ частиц с размером, лежащим в интервале 3-50 нм, содержат неосажденные е-антигены или специфичные антигены, аналогичные частицы Дана. Антиген гепатита и е-антиген содержатся в вакцине в количестве, достаточном цля образования антител при введении нх в организм животного.

Для получения вакцины против гепатита В используют материал, состоящий из плазмы, полученной из хронического носителя, который содержит антигены. Такая плазма также содержит большое количество частиц Дана и волокон, не содержащих объединенного анти-е-антитела. Плазма может быть получена от клинически здоровых человеческих хронических носителей нВ, а также от шимпанзе, которых

728720 естественно или искусственно инфицировали вирусом HB и которые становились хроническими носителями е-антиген положительногo HBsAg.

Исходный материал должен быть бактериологически стерильным и должен быть свободным от присутствия адвентициальных вирусов.

Очистку проводят обычным способом.

Из антигенсодержащего вещества крови удаляют примеси путем подкисления до рН 4,4-4,7. Выпавший осадок вместе с клеточными остатками удаляют центрифугиронанием в течение

20 мин со скоростью 10000 об/мин.

После этого материал смешивают с

2,5-4,5 вес.Ъ полиэтиленгликоля, !

5 предпочтительно с 3,0-4,5 вес.Ъ. Более ни з кие концентрации, например

3-4Ъ, могут осаждать крупные формы частиц и поэтому при определенных обстоятельствах являются предпочти- 20 тельными. Весовой процент полиэтиленгликоля рассчитывают по отношению к общему весу смеси. Таким образом, осаждают антигенный материал, содержащий гепатит В с более крупным 25 размером частиц, например 30-50 нм, а также часть материала, содержащего оболочкоподобный гепатитный В поверхностный антиген. Осадок, содержащий

HBsAg, регенерируют, и добавляют некоторое количество воды при рН 4,9—

5,1. Образуется осадок, содержащий белковое вещество и полиэтиленгликоль, а жичкая фаза — надосадочная жидкость, содержащая HBsAg, содержит частицы Дана или волокнистое вещество, рН недостаточной жидкости доводят до 4,4-4,7. Затем ее смешивают с 3,0-4,5 нес.Ъ полиэтиленгликоля, считая на общий вес смеси, с образованием осадка, содержащего очищен- 40 ные частицы, содержащие HBsAg поверхностный антиген, имеющие оболочкооб.разную конфигурацию с размером частиц 20-30 нм и волокнистые частицы, содержащие HBsAg e-антиген, который не содержит какого-либо анти-е-антитела, причем волокнистые части— цы имеют диаметр 20-50 нм, а также частицы Дана со сферической конфигурацией, имеющие размер 40-50 нм и 50 имеющие липопротеиноную внешнюю сферу, содержащую HBsAg и е-антигены, а также содержащие сердцевину, включающую ДНК, ДНК полимеразу и HBsAg.

В результате регенерируют очищенный антигенный материал. После этого его обрабатывают с целью инактинации вируса, а полученный осадок растворяют в физиологическом растворе.

Температура каждой из смеси после Я каждой стадии смешивания поддержинают в интервале 0-80 С в ходе образоЯ вания осадков. Стадия очистки облегчается, если регенерацию усиливают в результате центрифугиронания с 65 последующими стадиями осаждения.

Полиэтиленгликоль используют н виде водного раствора, который содержит

30 вес.Ъ полиэтиленгликоля. Такой полиэтиленгликоль имеет мол. вес.

500-50000, предпочтительно около 6000.

Дальнейшую очистку осуществляют путем адсорбции очищенных антигенов на гидроксилаппатите с использованием хроматографии. Частично очищенные антигены пропускают через хроматографическую колонку, содержащую гидроксилапатит, на котором они адсорбируются. Дополнительно очищенные антигены затем регенерируют с использованием мчогоступенчатого элюирования. Частицы с размером 2550 нм регенерируются отдельно от фракций с частицами более мелкого размера (16-22 нм) и от основной массы сывороточных протеинов. После очистки фракция более крупных частиц может быть инфекционной. Для этого осуществляют инактивацию. Целевой продукт инактинируют обработкой формалином в концентрации 1:2000 в течение 4 дней при 37 С с использованием обычных методик или облучением рентгеновскими лучами. Вакцину осветляют путем фильтрации через

MiIIipore 0,22, фильтр или эквивалентный фильтр перед добавлением формалина или PJ -пропиолактона.

После инактивации конечный продукт подвергают диафильтрации с использованием Amicon РПЗО фильтра или эквивалентного фильтра против

0,9Ъ NaCI, содержащей 1:10000 ThiomerasaI и любой стабилизатор, для удаления низкомолекулярных соедине- ний, используемых для инактинации, затем стерильно фильтруют и соответствующим образом разливают в стерильные ампулы для модификации или замораживания, Вакцину используют на отсу".ствие инфекциозности, иммунологическую активность.

Вакцину можно применять путем подкожной или ннутримышечной инъекции. Применяют обычно около днух доз в месяц с последующим введением вспомогательного вещества н период от 6 мес. до 1 года после перничной иммунизации. Первоначальная дозировка зависит от веса организма, а последующие дозировки — в зависимости от уровня антител в крови после первоначальной иммунизации.

Использование получаемой вакцины против гепатита В предотвращает хроническое заболевание печени.

Пример 1. Очистка и определение НВ ассоциированных частиц из

7,8 л плазмы от одного шимпанзе-носителя HBsAg.

Вещества и методики. Источник

HBsAg.

Антиген очищают из объединенной плазмы носителя шимпанзе, преднари728720 тельно инокулирэванйого человеческой

HBsAg — положительной.плазмой, относящейся к adn подтипу. е-Антиген присутствует на поверхности способных к идентификации частиц Дана и используемой плазме.

Очистка HBsAg и е-антигена.

HBsAg и е-антиген выделяют из плазмы путем осаждения с помощью полиэтиленгликоля (PEG). Повторно суспендированный осадок HBsAg и е-антигена очищают хроматографированием на колонке с гидроксилапатитом. Конечные стадии очистки включают плотностное градиентное центрифугирование.

Осаждение HBsAg и е-антигена с помощью PEG.

На стадии, предшествующей очистке 7,800 мп HBsAg и на содержащей е-антигена плазмы, устанавливают рН 4,6 и добавляют ЗОЪ-ный раствор 2()

PEG в дистиллированной. воде до приблизительно 2Ъ концентрации. Раствор оставляют на ночь при 4 С и осветляют центрифугированием HBsAg во всплывшем слое, осаждают увеличением концентрации PEG до 4Ъ. Всплывший слой после стояния в течение ночи при 4 С декантируют и отбрасывают. Осадок

HBsAg (содержащий е- антиген) ресуспендируют до 500 мл в дистиллированной воде. Основную часть PEG с некоторыми примесями осаждают, устанавливая рН раствора равным 5,0 и осадок удаляют центрифугированием. Прозрачный верхний слой доводят до рН 4,6 и HBsAg и ассоциированный с частицей е-А HBsAg (e) осаждают в результате добавления ЗОЪ раствора

PEG до конечной концентрации 4Ъ.

HBsAg/е удаляют центрифугированием после стояния образца в течение но- 40 чи при 4 С. Наконец, осадок HBsAg/е о ресуспендируют до 320 мл в дистиллированной воде.

Хроматографирование на колонке с гидроксилапатитом. 44

50 мл ресуспендированного .PEG осадка HBsAg/å пропускают через колонку 6,5 X 16,5 с гидроксилапатитом и элюируют прерывистым градиентом фосфатного буфера. В следующем экс- 5{) перименте 200 мл образца подвергают частичной очистке на колонке

6,5 X 35 см с гидроксилапатитом.

HBsAg, элюированный совместно с первым протеиновым пиком, пропускают

55 через колонку с гидроксилапатитом во второй раз.

Плотностное градиентное центрифугирование.

Фракции HBsAg, выделенные хроматографированием на колонке, очищают 40 скоростным зональным центрифугированием. Прерывистый градиент получают при использовании 3 мл 60 Ъ и 7 мл

40Ъ сахарозы в 0,02 М натрийфосфатном буфере при рН 7,2 (содержащем

0,02Ъ NaHq) .

В каждую пробирку загружают по

20 мл образца и центрируют на Spinso

SW 25,1 роторе при 18000 об/мин в течениЕ. 18 ч.Фракции объемом 1!мл собирают по каплям со дна пробирок и анализируют на содержание НВздд, Фракции, содержащие максимальное количество антигенной активности, объединяют, тщательно диализируют и концентрируют ультрафильтрацией с использованием мембраны с 30000 MW отжимным рантом (Амикон РМ-30) . -.Концентрированные фракции HBsAg подвергают конечным стадиям очистки изопикническим связыванием в линейном градиенте CsCI и скоростному зональному центрифугированию в прерывисТоМ градиенте сахарозы при обычно используемых условиях.

Методы детектирования.

3а содержанием HBsAg следят методом встречного электрофореза (CEP) или твердо-фазной радиоиммунопробой

Ausria 1 или II, Abbott Laboratories

Концентрацию протеина устанавливают при 280 нм с использованием микрометодики KjehIdahI

Критерий чистоты HBsAg.

Образцы после каждой стадии очистки анализируют методами целлюлозоацетатного электрофореза, иммуноэлектрофореза и испытаниями диффузии в системе агарового геля по отноше— нию к поливалентной аытинормальной человеческой плазмапротеиновой антисыворотке.

Полиакриламидный гелевый электрофорез.

Аликвоты образцов, содержащие

0,01 натрий фосфатный буфер при рН 7,2, 1Ъ натрий додецилсульфата, 1Ъ -меркаптоэтанола и 10Ъ глицерина, нагревают в течение 2 мин на кипящей водяной бане, обрабатывают 7,510Ъ найтрийдодецилсульфатакриламидными гелями.

Результаты очистки HBsAg/е положительных сывороток осаждением с помощью полиэтиленгликоля представлены в таблице. Около 87Ъ первоначального протеина плазмы удаляются на первой стадии осаждения HBsAg (которая включает предочистку при концентрации

PEG 2Ъ) . Конечный выход после двух последовательных стадий осаждения с помощью PEG лрказывает количественную регенерацию HBsAg в присутствии лишь

4Ъ первоначальных протеинов.

Очистка объединенного HBsAg шимпанзе осаждением с помощью PEG-6000.

728720

Образец

Ь и

Первоначальная

HBsAg-плазма

100

7,800 512

429,0

Первое осаждение

4% PEG

6,9

55,0

7,080

500

20 7

16 6 80

Второе осаждение

4% PEG 320 10 000

50 мл ресуспендированного PEG осадка НВэАу фракционируют хроматографированием на гидроксилапатите.

Элюат группируют на семь фракций, которые диализируют по сравнению с 0,02 М натрий-фосфатным буфером при рН 7,2 (содержащим 0,02% азица.натрия) и концентрируют ультрафилы- 2О рацией. Концентрированные образцы анализируют на протеины при 280 нм и на присутствие HBsAg методом CEP.

200 мл ресуспендированного PEG осадка HBsAg Фракционируют на 1000 мл колонке с гидроксилапатитом. Фракции HBsAg из первого протеинового пика (группа 1: фракции 38-83) и оставшийся элюат (группа II фракции

84-110) объединяют и концентрируют до 75 мл ультрафильтрацией.

Концентрированный образец из группы 1 повторно хроматографируют на колонк объемом 1000 мл с гидроксилапатитом.

Элюат объединяют на восемь фракций. Объединенные образцы концентрируют ультрафильтрацией и промывают

0,02 М натрий-фосфатным буфером при рН 7,2 (содержащим 0,02% азида натрия) . Эти образцы анализируют на 40 протеин и HBsAG.

Анализ образцов на содержание примесей методом иммуноэлектрофореза обнаружил очень слабую линию преципитации во фракции I, более сильную линию во фракции ll — Vl и сильно выраженную широкую линию в объединенных фракциях Vl(-ЧИ), которые мигрируют между альфа и альбуминной областями °

Электронн ая микроскопия образцов обнаружила в основном сферические частицы с диаметром 22-28 нм во фракциях 1 — ill сферические частицы и волокна, но фракциях lV -Ql, гла.вным образом небольшие сферические ча стицы и некоторое количество волокон но фракциях Vll ч Vill

Концентрированные образцы из предыдущих стадий подвергали полной очистке плотностным градиентным цент- Щ рифугиронанием.

Очищенные препараты HBsAg, состоящие главным образом из сферических частиц диаметром 20-22 нм, сферических частиц диаметром 22-28 нм, волокон различного размера и частиц

Дана, содержащих по 100 мг протеина, анализируют на полипептидный состав полиакриламид гелевым электрофорезом.

Количественную разницу наблюдают н протеиновых пиках индивидуальных образцов.

° Пики карбогидратов низкого молекулярного веса представляют собой гликолипиды, поскольку они не проявляются при голубом окрашивании по

Coomassie.

Вакцину готовят иэ фракций крупных частиц, полученных в результате добавления человеческого сывороточного альбумина с концентрацией

0,5 мг/мл с последующей инактинацией по сериям облучением от кобальтового источника (2,5 миллиона рад) инактивацией формалином с использованием общепринятых методик (37 С, 96 ч, концентрация 1:2,000), с последующим использованием Р-пропиолактона по методикам, обычно используемым при производстве вакцин против бешенства.

Пример 2. Модифицированная .усонершенствованная PEG методика для выделения HBsAg/е.

Модифицированную методику для осаждения PEG используют на 2,6 л смешанной НВэА9, содержащей плазмы от одного шимпанзе-носителя, содержащего е-антиген н необъединенном, неосажденном виде. рН плазмы устанавливают равным приблизительно 4,6 и немедленно добавляют 30%-ный раствор PEG до конечной концентрации 2%.

Раствор вымораживают на льду н течение 30 мин (вместо стояния в течение ночи при 4 С, как в предыдущем примере) и осадок удаляют центриФугированием.

Во всплывшем слое, содержащем

HBsAg, устанавливают концентрацйю

PEG, равную 4% (нместо 4,5% н предыдущем примере) в результате добавления б,б ч на 100 30%-ного раствора

PEG при комнатной температуре. Суспензию снова вымораживают на льду в течение 30 мин и осажденный

HBsAg/е удаляют центрифугиронанием.

Осадок ресуспендируют до 200 мл в дистиллированной воде. Основную часть

PEG и сопутствующих примес и ) д ляю

10 путем установления рН, равным 5, 0, вымаааживанием раствора на льду в течение 30 мин и удалением полученного в результате осадка центрифугираванием. рН прозрачного всплывшего слоя иэ предыдущей стадии вновь устанавливают равным 4,6 и добавляют 30%

PEG да конечной концентрации порядка 3% (вместо 4,.0-4,5%, как зта целали pa«ee). Вещество вновь вымаракивают на льду в течение 30 мин и асацак HB sAg /e aësr

Осадок из предыдущей стадии, содержащий НВзАу/е, суспендируют в

10 мл дистиллированной воды. Оcíoâ. ную массу PFG осаждают в результате установле rrra рН равным 5,0. После

О стояния в течение ночи при 4 С суспензию осветляют центрифугированием.

Прозрачный верхний слой, содержащий

HBsAg/e, дополняют 0,5 N натрий-фосФатным буферам при рН 7,2 да конечной концентрации порядка 0,03 И и устанавливают конечный объем, равный

120 мл с помощью дистиллированной воды.

Результаты такой очистки показывают более чем 33-кратную очистку HBsAg

Пример 3. бракциониравание

НВзА

Ресуспендираванный PEG осадок

HBsAg/е (пример 2) обрабатывают периодически гидраксилапатитом вместо процесса хроматаграфирования на колонке, .500 мл объем насадачнаго гидроксилапатита (Bio-Rad-Labs) суспендиру т в 800 мл 0,02 М натрий-фосфатнам буфере при рН 7,2 и после добавления препарата. HBsAg/е перемешивают магнитной мешалкой в течение

30 мин при комнатной температуре.

Шлам делят на две равные аликвоты и центрифугируют в чашах емкостью

1 л на центрифуге SorvaII RC-3 со скоростью 4,000 аб/мин в течение

10 мин. Верхний слой декантируют и осадок последовательно промывают порциями в 1 л с 0,02 N и 0,05% .на трий-фасфатнага буфера при рН 7,2, Элюаты объединяют, концентрируют ультрафильтрацией с использованием мембраны PN-30 и диафильтруют 0,02 N

Фосфатным буфером с рН 7,.?, 0,02%

НаН3 и доводят да объема 60 мл тем же буфером.

Концентрированный образец далее очищают скоростным зональным центрифугираванием в прерывном градиенте сахаразы.

Отделенные частицы HBsAg/е разделяют на три фракции, диализируют и концентрируют ультрафильтрацией.

Образцы,. исследованные методам электрон",oé микроскопии, обнаружили главным образом крупные волокна и частицы Дана во фракции 1; волокна, частицы Дана и сферические частицы д1ламетром 22 -28 нм во фракции и и сферические частицы д)ламетрам 20-28 нм во фракции tl.

Пример 4;:Дисаггрегация

HBsAg/å частиц с помощью ионных и неионных детергентав.

HBsAg /e частицы обрабатывают при комнатной температуре (в течение

5 мин — 2 ч) следующими детергентал: 0,5-2% ibohidett NP (детергент) (SheII 0iI Са.), 0,5-2% Твина 80 (поверхностна-активный агент), 5-10%

Тритона Х-100 (органический поверхнаст ro-aктиэный агент), 0,1-1,0% дадецилсульбата натрия и т.д. Целью обработки является усиление антигеннай активности в образцах, обработанных детергентом, и инактивация инфекциазности этих образцов.

Оптимальные условия обработки определяют путем анализа образцов перед и после обработки детергентом с использованием тонкослайной и изоэлектрической фокусировки. Индивидуальные компоненты дисаггрегированных образцов могут быть выделены с использованием различных методик разделения, например молекулярным исключением, адсорбцией, способами ионообменного хроматографическога ультрацентрифугирования, различными методами электрофореза и т.д.

Одним из наиболее высокоэффективных способов является метод занного конBer

Иэоэлектрическое фокусирование, Тонкие слои получают на Sephadex75 гель целлюлазнога носителя в 1%нам растворе амфолина при рН 4,0-6,0 или рН 3,5 — 10,0. Пластины помещают в льтипоравое устройство. Отпечат

:-:а зоны 0,5 — 1 см. Индивидуальные завы далее разрезают на более мелкие части, с :ачивают 0,2 мл буферного салевага раствора и элюируют 0,2 мл нормальной (не содержащей HBsAg u анти-НВ) человеческой сыворотки. ,"1ли1

Полоски между разделенными обраэцамн также разрезают, элюируют 0,4 мл дегазираваннай дистиллированной воды н используют для измерения рН. Если берут дгa отпечатка, то первый используют для окрашивания на протеин а второй разрезают для радиоиммунаанализа на HBsAg и измерений рН. йликвоту из каждого образца обрабатывают 5-10% неианного детергента i r2pèòîí Х-100) в течение 20 мин при комнатной температуре перед кантактиравалиeм с гелем и выдерживают при описанных выше условиях при сравнении с образцом, который еще не обрабатывали детергентами.

;: .-;.,/ -.

Е КОЛО: —:Н,ст, КГ!;! i аП2 ТИТЕ т анаЛИ 3((: : "! т,, (3 (>1 ной изоэле:с), Препараf состоящий i >д 3;,-. - Об, Яз сферичес)ких частс(с(:ц)(д.: е !.po;:. 2

2 8 нм и Гете(эот ен ной с:1, с;> (:< . readability="74">

:кс>с(4ей B QciloBHQ(v боле —...(рт n (ь>Г ..а!) ТОНО Ут Т 0). IJOC !1 ЕЛ! ЬНО i iò! 3,, т . . < . rir-="" ..="" readability="81">

Е 3 Еро ГЕН k(QC си В П>ОБЕ,Э 1(1!ОСТ -,Qi)т "„;,i) я

Дс чаГтиЦ ., ОснО Вной 17!! (;-

И дда НЕ3На .ИтЕЛЬНЬЬХ Iòh) B с К (ИВ(!ОС; ,".и наблюдали при рЫ " О--,. 1 и рН

4 /:;т -4 „. 6 . Обрсзцы (7ocf(e 0()ps I)QT)(kr

3(L 0 0 H0(Е -! HB аи Ти ГЕН,-1 ой;-„(:13; Bki0 01 8 !",с)УГих э кспе(эим

ПО ВЬБттЕНИЕ с!(

5, 3,цо 5,9 и незначительный пик i(p?H

»I- // — 7 т 2., =---Антигенная актиьност(-, 0 а ООН аP>v/>KЕН а ЛИШЬ В Ин ТeРвдЛЕ рН, I) 4 . = >. QT антиГен был Об(= (Цэч

3 ТОЙ О Лс> (т(Нст Ir/ BC TB Èòý>I>Ь 1; -,rvi !

10!)Ь)Tа-(Иe)V(.I:;ИффУ3ИИ На Х CЛe 2ГСPта (соне нный Вс(кЦиОннь) прОЦ>т кT T(QJ)r/ "

:.B1) I по методике примера 1 с и споль"Овд НИ ЕМ ЧЕЛС ВЕЧЕ Скос 0 аЛЬОУМИН д. и метоцик инактивации с желаемой ара(!е детерГентнОЙ ассОцидцеи *

П р -! !v(е р 5 . Очистка. pcicTBQp(! мото с--антиге!.а из плазмы хрони (ес-" ((их носителей IIBsAg/е для .-..тcsofii 30-,:а:-(ия В кдт!естве Вакцины

jIBsAg /e пол

>эр)>()пто !э(с!а превалирует во многих плазмах та)

1 О бой! НДеал ьнь(Й исто!) 1 H гrsi для яммуниза!(ии.

Свойства растворимо "о е-антиг.",;:: =. бы/!н определены как следующие: плотнссть CsCI/Õ>28 — 1,29; S2(3„/= .1>1!6, молекулярный Brsc 150000-900000; изоэлектрическая точка 5,5-6,, б, элю);роВдние из диэтиламиноэти/л целлюл

На Основании BTI?x. свойств бьв: работан следующий сг(особ очистки, EIBsAg/å плазму вна-ыле частично осаждают PEG 6000 с удалением НВВ 1(з ассоциированных частиц и некоторы

Осаждения 5 9%/ предпОчтительно 8 - -.

Вес//обсьем/ РЕ6 ОООО при рН 7 > О „20 О. с последующим осаждением е-антиген=-. н некоторых протеинов плазмы с по:.!Qщью РЕ(при 9-13% PEG концентрации.

ЦНИИ(!И Заказ 3171/54 .Гт!

43)mHBл 1II1II EIBте>-1 T, г, 1 дд тт. i. — с k i. / .!isii, !"!P J В,! 1;т

; >тп (ро! а, "О 30 Лв с 1 I 11 С 6!"-т -rrc И)1/ =. ° . (> (! 1 —.. (vo i ф О К ; . i 1:, l i, К Е: 0 .

1)0, Г(Э>(д >,.=.(, 2 :. =.:.

)Н 3 10 (с ; . 1 ":,= 11" 0

05 (7 .(,! . О; 0 11! .,.и

Е Р -. 3 К 0 —, (- ;= >(С .11((с r 1 1 ГМ;: б, 1 ней( радliе! 10!т! О, (0 i ) ."! а01 В 10(т! 3(е

fj 1фе1)е ., i-— - ./:g -! >(, 1)> j>, JB 1 при 0 1 э !с

I4BCÕ с BHkj

Ij(iCi(ic. Кoi) (1 еН;-тди!)О!> д И(И! я > - =-:;13И:l р2>Ц>(ЕИ О(- I)BÞ! J 0 ":h Qll. (13 CH .ц .!)1 (Ci

С>:,Иенте сахгрозь!

)(ЛИ Э -(BH В сIЛОТ ИОСТ НОМ I pc. д(унтe сс рpе(е !cpa!)!(el(1 1,6 пика

0 .lи(ценнь. и д:- -т9 c"1 д били зируlОт дс— бс(влением длхсб>/ J(isci. челОВеческой сыворотки до концеи Г-)эации поря цка

0 . Э lv .is/iv!3 i, Такие препараты при кос!Цен трации

ОКОЛО 20 iv(1(B !(B дозу (0(>/T бЫТЬ пользова«ы В качес(ве вакцинь. против гспатита Б после инак(ивдции >(стеРИ)(И 3 ".1 il И::,, J. I p i3 (1 3 l ñl Г 2 Е с ! С ! С С 0 б Г Q 3 B (. Л S - S i i (3 =

ВЫСИТ Ь Ci(С (i, 1ôè ×IIÎÑÒ с. Попу>(ан(!ОЙ >дд К

>i-ij-, r.—!,Нl! Я (j7QCQ 17 Г!ОЛ" -(Г if) BB)1ЦНН! * Jjr)0

Тив !. Bj(B7 И д. О ll „- ". --l,i ВЫцт ЛЕНИН Час ! Ь((т I I ББ>)(сат! Ib>3(Е дl; ТИ ГЕН HB крови )Оителе--; а: †.7:.Гена Гепати(= . R, ((дЩЕ ст сд - - () т И- — си С; Ti QC1(c 1-i1",(rт-,Е и

)(ll ак "И Вс(1>,ИЕЙ Q . ..О((> 1(31>:I .-с! .. ... I:.-- . : i 11)oc7 .) тт с!*с! 1>1: i. II i3! с1 3Jv!1, }

5 BCÃ, с ПС)ли . Т -(ЛЕ;1 Г>!!! КОЛЯ ПГЭИ 1)Н

/ (-,ОЛ!.сяют (то((рl1 4 . 9 -5 ., За! д(/т рН нацосадс,но-... -; жид)(о«" s r(osопят до

ПО Об l:!-0 (

И ". - с cr!, -,т.ТС; J r!3 Л- Вс>й Hpo„ ),у! T

;)ь ri ((О .. Г бра бОJ HQ. i (()Ормс Ji;;IH Qi i .: !! 8! («10П)(ОЛB J- . T, HQ(r(":4Л . Г блу -: д. ПЕ" 1 . О Ь> (Э т(И (iтт )Тт> - — >

"1 С т С -! и Н К Н:: с фо !. т () 1 т! ((. .-ЭЕ BO !)НИМдl111!с ПР:i Э ((Cl!rsj> i rë 3(-Н; - =„.-(7 C"((Ä = -6 (с-19 1

1, 424-8 9 1,

Способ получения вакцины против гепатита в Способ получения вакцины против гепатита в Способ получения вакцины против гепатита в Способ получения вакцины против гепатита в Способ получения вакцины против гепатита в Способ получения вакцины против гепатита в 

Source: www.FindPatent.ru
Отзыв о лечении гепатита C

Посмотрите видео-отзыв нашего пациента о лечении препаратом Velasof

arrow Watch this video
  • tabletka

    Универсальная пангенотипная формула Софосбувир + Велпатасвир уничтожает вирус гепатита С в 98% случаев

  • pig

    Уникально низкая цена на рынке, нет переплат перекупщикам

  • nagrada

    Идеальное соотношение цены и качества, лицензия от Gilead

doctor
закажите препараты
прямо сейчас!
three tabletes
Сертификаты

one ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit. Ad animi, aspernatur aut consectetur doloremque eius expedita illo nam necessitatibus nihil nulla, perspiciatis quam quibusdam vero!

Сертификаты

two ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit. Ad animi, aspernatur aut consectetur doloremque eius expedita illo nam necessitatibus nihil nulla, perspiciatis quam quibusdam vero!

Сертификаты

three ipsum dolor sit amet, consectetur adipisicing elit. Ad animi, aspernatur aut consectetur doloremque eius expedita illo nam necessitatibus nihil nulla, perspiciatis quam quibusdam vero!

Как мы работаем
  • 1Звоните бесплатно из любого города рф по Или оставляете заявку на сайте
  • 2консультируем по подбору препарата И продолжительности терапии
  • 3Оправляем препараты курьером на дом Или наложенным платежом по почте
  • 4Получаете лекарство И оплачиваете
  • 5Вылечиваетесь полностью От гепатита с
people
Отзывы наших пациентов

Lorem Ipsum is simply dummy text of the printing and typesetting industry. Lorem the industry's standard dummy text ever unknown.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.

viewer 1 Инна Николаева г. Киев

Contrary to popular belief, Lorem not simply random text. It has roots a piece of classical Latin liter.